背景资料:Northern检测可用于检测RNA的大小、丰度和电泳时的迁移位置等。由于DNA Blot以其发明人Edwin Southern的名字命名为“Southern Blot”,与其类似的RNA Blot因此被命名为“Northern Blot”。该方法最大的优势是可以通过印迹检测确定目的RNA的长度或者说是电泳时的迁移位置,并且不受RNA末端修饰的影响。但是实际操作中,Northern Blot实验繁琐复杂、极不稳定、失败几率非常高!
实验原理:该方法是一种将RNA从凝胶中转移到转印膜上的分子技术,利用带有标记物的探针与转印膜上的RNA进行杂交,经过显色反应后,将不可见的样品以条带形式呈现在转印膜上,通过条带迁移距离以及条带亮度来分析RNA条带的大小及其丰度。
图1.Northern blot实验一般流程图。
产品推荐:- Northern检测试剂盒(生物素标记探针,货号:YTB4661),即生物素Northern检测试剂盒或生物素标记探针Northern Blot检测试剂盒,包含了基于生物素标记探针进行Northern检测所需的凝胶制备、上样、电泳、转膜、预杂交和杂交、膜的洗涤、生物素标记探针的化学发光检测等一系列试剂,为基于生物素标记探针的Northern检测提供了比较完整的解决方案,使非常繁琐的Northern检测变得相对比较简单易行。
产品特点:
- 高效快速:本试剂盒使用了快速杂交液(货号:YTB4663),含有独特的杂交加速试剂,可以大大提高杂交速度和检测灵敏度,通常杂交2h即可达到杂交过夜的效果;
- 检测灵敏度高:本试剂盒提供了超高灵敏度的化学发光检测试剂BalbECL UT,可以借助Streptavidin-HRP和生物素标记探针的结合,实现Northern的超高灵敏度检测。
- Northern检测试剂盒(生物素标记探针,小RNA,货号:YTB4662),即生物素Northern小RNA检测试剂盒或生物素标记探针小RNA Northern Blot检测试剂盒,包含了基于生物素标记探针进行Northern检测所需的凝胶制备、上样、电泳、转膜、预杂交和杂交、膜的洗涤、生物素标记探针的化学发光检测等一系列试剂,为基于生物素标记探针的小RNA Northern检测提供了比较完整的解决方案,使非常繁琐的小RNA Northern检测变得相对比较简单易行。
产品效果:
如图2所示,本制品用于Northern检测小鼠肝脏总RNA中tRNA-Ala或miRNA-122时,仅1ng或0.5μg的总RNA样品通过2h的杂交就可以获得和杂交过夜基本一致的良好检测信号。
图2.使用Northern检测试剂盒(生物素标记探针,小RNA,货号:YTB4662)进行Northern检测时,分别杂交2h和杂交过夜(overnight)的检测效果图。
产品特点:
- 高效快速:本试剂盒使用了快速杂交液(货号:YTB4663),含有独特的杂交加速试剂,可以大大提高杂交速度和检测灵敏度,通常杂交2h即可达到杂交过夜的效果;
- 检测灵敏度高:本试剂盒提供了超高灵敏度的化学发光检测试剂BalbECL UT,可以借助Streptavidin-HRP和生物素标记探针的结合,实现Northern的超高灵敏度检测。
- 快速杂交液(货号:YTB4663),是一种用于Northern、Southern实验中RNA或DNA与RNA、DNA或Oligonucleotide探针快速高效杂交的溶液。本制品为DNase/RNase/Protease-free的无菌产品,可以和Northern检测试剂盒(生物素标记探针,货号:YTB4661)以及Northern检测试剂盒(生物素标记探针,小RNA,货号:YTB4662)配合使用。
产品特点:
- 灵敏度高:本制品为高灵敏度快速杂交液,含有独特的杂交加速试剂,可以大大提高杂交速度和检测灵敏度;
- 杂交速度快:通常杂交2h即可达到杂交过夜的效果。
- Northern印迹检测探针去除液。我公司提供了三种强度去除液供大家选择。
Northern第一轮检测完成后,需要去除探针以再次进行内参RNA等的检测时,推荐使用百奥莱博生产的Northern探针去除液(温和型,货号:YTB4666)、Northern探针去除液(中强度,货号:YTB4667)或Northern探针去除液(强力型,货号:YTB4668)这三种Northern探针去除液之一进行探针的去除。优先推荐尝试中强度型的,如果去除效果欠佳可以尝试去除效果更强但操作不是很方便的强力型探针去除液。如有需要也可以使用去除效果更加温和的温和型探针去除液。
选购说明:Northern检测试剂盒(生物素标记探针,货号:YTB4661)和
Northern检测试剂盒(生物素标记探针,小RNA,货号:YTB4662)不包括生物素标记探针制备相关试剂。生物素标记探针的制备,推荐选购百奥莱博的
生物素标记DNA试剂盒(TdT加尾法,货号:YT030)或
生物素标记DNA探针制备试剂盒(随机引物法,货号:YT031)以制备生物素标记的Oligonucleotide或DNA探针,或选择其它适当方式制备生物素标记探针。